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DC-CIK 細胞的制備方法

CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells”的縮寫,中文全稱為“細胞因子誘導的殺傷細胞”。CIK 是單個核細胞在CD3 單抗和多種細胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培養獲得的一群以CD3+CD56+細胞為主要效應細胞的異質細胞群.


DC 是“Dendritic Cells”的縮寫,中文全稱為“樹突狀細胞”,因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。


DC-CIK 即DC 和CIK 細胞在體外共培養,然后回輸給患者。嚴格的說,最終的效應細胞是經DC 體外活化的CIK 細胞。多項研究表明,DC 與CIK 具有協同作用,共同孵育后,DC 表面共刺激分子的表達及抗原遞呈能力均明顯提高,而CIK 的增殖能力和體內外細胞毒活性也得以增強,因此DC-CIK 較單獨的CIK 治療更為有效。

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小鼠骨髓來源樹突狀細胞(BMDC)的培養

雖然DC 存在于體內多種組織中,但含量很少,無法滿足科學研究和臨床治療的需要,所以人們嘗試多種方法來體外培養和擴增DC。對于人,最常用的方法是從人外周血單個核細胞(PBMC)誘導DC 的產生。而對于小鼠,最常見的方法是從骨髓細胞誘導產生DC,即骨髓來源的DC(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDC)。

本文主要介紹三種經典的誘導BMDC的方法:

【經典的BMDC 培養法】-Inaba 法(改良)

【BMDC 大量制備法】-Son 法

【BMDC 大量制備法】-Lutz 法






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DC細胞的制備方法

DC 需從其它種類細胞誘導分化而來,且可分為不同的成熟階段,所以通常分為2個步驟進行培養:

Step 1:從DC 的祖細胞(如單核細胞)誘導分化為未成熟DC (immature DC,iDC);
1. 血細胞分離機或Ficoll分離外周血PBMC
2. 貼壁法獲得單核細胞
3. 加入GM-CSF (500-1,000U/ml)和IL-4 (500U/ml)


Step 2:從iDC 誘導分化為成熟DC (mature DC,mDC)。
加入:1. TNF-alpha(10ng/ml) 2. IL-1beta (10ng/ml) 3. IL-6 (1000 U/ml) 4. PGE2 (1ug/ml)


獲得DC細胞

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